Проточната цитометрия е диагностична и изследователска техника, позната от много години и широко използвана в онкологията. Проточната цитометрия позволява клетките, които съставят суспензия в ламинарен или стратифициран, течен поток, да бъдат изследвани с устройство, наречено проточен цитометър. Какви са показанията за проточна цитометрия и как се прави?
Поточната цитометрия се използва при диагностицирането на хематологични новообразувания, тъй като те са течни тумори, но това е само спомагателен метод. Струва си обаче да се помни, че има един рак, който може да бъде диагностициран само с този метод. Това е хронична лимфоцитна левкемия.
При други неопластични заболявания проточната цитометрия се използва като диагностично помагало, тъй като показва много важни характеристики на неопластичните клетки. Този метод се използва и за оценка на ефективността на приложеното лечение.
Поточна цитометрия - какво показва тя?
Течният поток, съдържащ изпитваните частици, се прекарва с постоянна скорост (100-2000 частици в секунда) през измервателната зона на цитометъра. Тук оптичните методи анализират форми, размери, вътрешна структура на клетките и тяхното съдържание, например ДНК. Всички клетки са оптически маркирани.
Измерванията се основават на разсейващите свойства на лазерната светлина от отделни клетки или техните компоненти (ядра, хромозоми, митохондрии) или индуцираната от тях флуоресценция.
Оптичните сигнали се преобразуват в електрически сигнали, които след анализ се представят графично като моно- или бипараметрични разпределения.
Цитометърът също така позволява разделяне на частиците след излизане от зоната на измерване. Може да се каже, че апаратът подрежда (отделя) клетки с едни и същи съставни елементи (препаративно сортиране) или изолира определени видове клетки (аналитично сортиране).
Поточната цитометрия дава възможност за изследване на популационните характеристики на клетките, анализ на клетъчните компоненти (особено като нуклеинови киселини, протеини, повърхностни и клетъчни антигени), ензимна активност, мембранен потенциал, митохондриална активност, вътреклетъчно рН, транспортиране на йони и мембранна течливост.
Проточна цитометрия - приложение
Проточната цитометрия, използвана в диагностиката, позволява да се определи фенотипът на неопластичните клетки и експресията на отделни протеини. За да се постигне това, се използват маркирани флуоресцентни антитела, които се свързват по характерен начин с антигени на повърхността на клетъчната мембрана. Благодарение на това е възможно да се определи степента на тяхната диференциация, произход, прогностични и терапевтични маркери, които улесняват решението за по-нататъшни диагностични и терапевтични процедури.
Друго приложение за поточна цитометрия е наблюдението на ефективността на приложеното лечение чрез оценка на т.нар „остатъчно заболяване“, което е делът на клетките с тумороподобни фенотипове, които остават след лечението.
Поточната цитометрия също улеснява изследванията на рака. Благодарение на този метод е възможно да се търси например рецептори, които са на повърхността на неопластичните клетки и могат да се превърнат в мишени за лечение.
Методът позволява да се оцени активността на протеините вътре в клетката. Също така е възможно да се оцени клетъчният цикъл, например чрез определяне на количеството ДНК в клетката.
В процеса на пролиферация клетката преминава през клетъчния цикъл през фази, където удвоява количеството ДНК. Чрез оценка на това количество е възможно да се посочи в каква фаза се намират клетките, дали се размножават или не или преминават в апоптоза. С други думи, с помощта на поточна цитометрия можете да разберете дали клетките се подготвят за апоптоза, програмиран процес на смърт.
Поточна цитометрия - бъдещето
Проточната цитометрия е известна и използвана в медицината от няколко десетилетия. Той обаче непрекъснато се подобрява и създава нови възможности за диагностика и изследване. През първия период на използване на този метод беше възможно само да се определи размерът и степента на гранулиране на клетките.
Използването на лазерна светлина в устройства за поточна цитометрия ви позволява да възбудите определени флуоресцентни маркери и след това да оцените тяхното излъчване. Съвременните цитометри позволяват значително увеличаване на броя на маркерите, които се оценяват едновременно, което определено води до увеличаване на чувствителността на този метод.
Ето защо се използва не само за диагностика на неопластични заболявания, но и за оценка на ефективността на лечението.
За автора
Прочетете още статии от този автор
