Тестът ELISA открива множество заболявания, поради което е намерил широко приложение в медицината и др. Тестът ELISA обаче е най-известен с диагностицирането си на лаймска болест. Какво представлява тестът ELISA? Как да тълкуваме резултатите? Каква е цената на теста?
Съдържание:
- Тест ELISA - какво открива? Прилагане на тест ELISA
- ELISA тест - какъв е тестът?
- ELISA тест и лаймска болест - кога да се извърши?
- ELISA тест - цена. Колко струва тест ELISA?
- ELISA тест - резултати. Могат ли да са фалшиви положителни резултати?
- ELISA тест - резултати. Могат ли да бъдат фалшиво отрицателни?
Тестът ELISA, т.е. ензимно-свързаният имуносорбентен анализ, е често използван лабораторен метод, който служи, наред с други, за количествено откриване на антитела в кръвта.
Поради тази причина тестът ELISA е намерил приложение в диагностиката на бактериални заболявания, като лаймска борелиоза.
Предимството на метода ELISA е неговата простота и възможността за бързо изпълнение, както и висока чувствителност. Методът ELISA се извършва с помощта на специални пластмасови плаки с ямки, пълни с например протеини на Borrelia (антигени) и специфични моноклонални антитела, които са предназначени да откриват антитела в пробата на пациента.
Тест ELISA - какво открива? Прилагане на тест ELISA
Високата чувствителност и простота на метода ELISA го правят приложим при диагностицирането на много заболявания, но е най-известен като диагностичен метод на лаймска болест.
В случай на диагноза лаймска борелиоза, т.нар индиректен ELISA, който позволява да се открият специфични IgM или IgG в тествания материал. По същия начин антителата могат да бъдат открити за диагностика:
- вирусни инфекции: херпесни вируси (херпес, херпес зостер, Epstein-Barr, цитомегаловирус), ХИВ, вируси на хепатит (HBV и HCV)
- протозойни инфекции: токсоплазмоза, лямблиоза
- автоимунни заболявания: цьолиакия (антитела срещу tTG или анти-DPG), болест на Хашимото (антитела срещу TG и анти-TPO), възпалителни заболявания на червата (антитела срещу ASCA и анти-ANCA)
- паразитни заболявания и алергии, при които се откриват специфични IgE антитела. Повишеното им ниво може да показва наличието на алергии, например към полени и храна, или паразитна инвазия (въоръжена тения, човешка аскарида)
Има и модификации на метода ELISA (т.нар. Сандвич ELISA), които позволяват откриването на проба от протеини, различни от антитела. Тогава целта на теста е да открие в биологичния материал:
- фрагменти от вируси или бактерии, най-често те са антигени, характерни за даден патоген
- серумни хормони, например естроген, пролактин, TSH, fT4, кортизол
- ензими, например калпротектин, панкреатична еластаза, алкална фосфатаза
- туморни маркери, например CA-125
- наличието на лекарства в серума
Този метод е приложим и в хранителната промишленост, където може да открие следи от алергени (напр. Мляко, фъстъци), ГМО или токсини в храната.
ELISA тест - за какво става въпрос?
Диагнозата, например, на лаймска болест по метода ELISA се състои в откриване на имунни протеини в биологичния материал - антитела, които възникват по време на отговора срещу антигените на Borrelia.
Антителата се тестват в два класа, IgM и IgG. IgM са първите антитела, които се появяват в тялото, когато влязат в контакт с бактерии, и с времето намаляват.
Тяхното място се заема от по-устойчиви IgG антитела, които могат да останат в тялото в продължение на няколко десетки години.
По този начин присъствието на бактерии в организма се изследва индиректно чрез откриване на антитела, специално насочени срещу спирохетите на Borrelia.
Антителата на различни етапи на инфекцията могат да бъдат насочени срещу различни протеини на Borrelia. Например на ранен етап това е протеинът p41.
В по-късните етапи започват да се появяват все повече и повече протеини, като p21, p30, p39, p43. Това е причината диагнозата Лаймска болест да е изключително трудна.
Изборът на бактериални протеини е изключително важен за теста, за да има висока диагностична стойност. Следователно рутинно при диагностицирането на лаймска болест трябва да се използват тестове ELISA от II поколение или III поколение, при които се избират групи протеини, за да се получи най-надежден резултат.
ELISA тест и лаймска болест. Кога да се направи?
Лаймската борелиоза е бактериално заболяване, причинено от бактерията Borrelia burgdorferi и многобройните й разновидности.
Диагнозата на заболяването не е лесна поради сложността на имунния отговор срещу Борелия и несъвършенствата на лабораторните методи.
Най-често използваният лабораторен метод е високочувствителният метод ELISA, който открива специфични антитела, издигнати срещу бактериални протеини.
При диагностицирането на лаймска болест се използва непрекият метод ELISA, при който се разграничават следните етапи:
- инкубация на ямките върху плочата с материал, събран от пациента, например серум. Ако в тествания материал има антитела срещу борелия, те се прикрепят към протеините в дъното на реакционната ямка
- след това излишният серум се изплаква със специална течност за измиване (буфер) и т.нар конюгат, т.е. антитяло, свързано с ензим, което се свързва с предварително свързани антитела в реакционните ямки
- след това се добавя субстратът за конюгата и настъпва цветна реакция (положителен резултат) или липса на цветна реакция (отрицателен резултат)
- последната стъпка е отчитането от четеца (спектрофотометър) на концентрацията на антитела срещу борелия в серума на пациента
Тестът ELISA за лаймска болест се извършва от кръв, а в случай на неврологични симптоми (невроборелиоза) и от цереброспиналната течност.
Синовиалната течност не трябва да се изследва, тъй като има голяма вероятност от фалшиво положителни резултати.
Основата за диагнозата на заболяването са клинични симптоми, които го показват, потвърдени от резултатите от лабораторни изследвания.
Добавянето на резултат от лабораторен тест без симптоми не позволява диагнозата на Лаймска болест, тъй като е доказано, че антителата срещу борелия се откриват и при здрави хора.
Серологичната диагноза на лаймска борелиоза започва с полуколичествен скрининг ELISA тест. Ако резултатът е отрицателен, това означава, че не са открити спирохети на Borrelia или резултатът е фалшиво отрицателен.
Ако резултатът е положителен или слабо положителен (двусмислен), трябва да се извърши потвърждаващо Western blot тестване, което се характеризира с висока специфичност.
Това е, за да се потвърди „истинността“ на получените резултати от ELISA. По време на диагностиката не можете да пропуснете нито една от горните стъпки и например да извършите незабавно диагностика с помощта на Western blot метод или да поставите диагноза само въз основа на положителен резултат от ELISA.
В Полша диагнозата Лаймска болест много често приключва на първия етап на скрининг, което причинява погрешно тълкуване на положителни или слабо положителни резултати.
Препоръчителна статия:
Тест за трансформация на лимфоцити (LTT) Добре е да знаетеELISA тест - цена. Колко струва тест ELISA?
Тестът струва около 60 PLN и се прави веднага. Можете обаче да изчакате около три месеца за резултатите от препращането.
ELISA тест - резултати. Могат ли да са фалшиви положителни резултати?
Фалшиво положителните резултати са резултат от кръстосаната реактивност на IgM антитела с други протеини. Антителата, произведени от тялото, могат „неправилно“ да разпознаят антиген от други микроорганизми като антиген на Borrelia.
Най-честите "грешки" се срещат при хора, заразени с трепонема палидум, херпесвируси, както и при хора със системен лупус еритематозус и други ревматични заболявания.
ELISA тест - резултати. Могат ли да бъдат фалшиво отрицателни?
Фалшиво отрицателни резултати могат да се появят на ранен етап от инфекцията, като в този случай тестът трябва да се повтори след около 3-4 седмици. Това се казва серологичен прозорец, това е началният период на инфекция, в който тялото все още не е „успяло“ да произведе специфични антитела.
Същото се отнася и за хората с имунна недостатъчност, които не произвеждат достатъчно антитела.
Голям проблем, особено при много интензивни инфекции, е появата на т.нар имунни комплекси, които се състоят от антигени на Борелия и специфични антитела за тях.
В резултат на това антителата стават „невидими“ за често използваните методи като ELISA и въпреки че присъстват в тествания материал, те не могат да бъдат открити.
В такива случаи лабораторията може да използва разграждане на имунни комплекси. Това лечение е предназначено за освобождаване на антителата. Този метод обаче не се използва широко поради липсата на стандартизация в лабораториите.
Заслужава си да се знаеЗащо диагностиката на лаймската болест не е лесна?
Това се дължи на сложността на имунния отговор срещу Борелия и ограниченията на лабораторните методи. Разнообразието от сортове и появата на нови, които причиняват инфекции, особено на европейския континент, не улесняват развитието на ефективни диагностични методи.
Напоследък в Европа се появяват още сортове, като Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana и Borrelia spielmanii. Освен това в тялото спирохетите на Borrelia могат да се превърнат в кисти или да останат на места на тялото, недостъпни за клетките на имунната система.
По този начин е "невидим" за имунната система. Освен това е доказано, че тъканите могат да съдържат фрагменти от бактерии, които имат силно противовъзпалителни свойства. Смята се, че те са отговорни за хроничните симптоми на лаймската болест, въпреки отрицателните резултати от лабораторните тестове.
Литература
1. Witecka-Knysz E. et al. Лаймска болест: защо диагностиката е толкова трудна? Лабораторен диагностик април 2007.
2. Moore A. et al. Текущи насоки, често срещани клинични клопки и бъдещи указания за лабораторна диагностика на лаймска болест, САЩ. Emerg Infect Dis. 2016 юли; 22 (7).
3. Лабораторна диагностика на болести, пренасяни от кърлежи Препоръки на работната група: Национална камара на лабораторните диагностици, Национален институт за обществено здраве-Национален институт по хигиена, Национален консултант в областта на инфекциозните болести, Катедра по инфекциозни болести и невроинфекции, Медицински университет в Бялосток, Полско дружество по вирусология, Варшава 2014 г.
4. Hosseini S. et al.: Имуносорбентен анализ, свързан с ензими (ELISA) От A до Z. Springer 2017.
